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一、實驗原理
懸尾實驗(Tail suspension test, TST)是一種經(jīng)典而又能快速評價抗抑郁藥物、興奮藥物、鎮(zhèn)靜藥物藥效的方法。其原理是利用小鼠懸尾后企圖逃脫但又無法逃脫,從而放棄掙扎,進入*的抑郁不動狀態(tài),實驗過程中記錄動物不動時間來反映抑郁狀態(tài),抗抑郁藥物、興奮藥物能明顯地縮短改變其狀態(tài)。
將實驗動物的尾部進行固定,使其頭部向下懸掛,動物在該環(huán)境中掙扎,企圖擺脫該困境,在經(jīng)過努力仍無法擺脫后,出現(xiàn)間斷性不動,顯示“行為絕望”狀態(tài)。動物在該環(huán)境中拼命掙扎試圖逃跑又無法逃脫,從而提供了一個無可回避的壓迫環(huán)境,一段時間的實驗后,記錄處于該環(huán)境的動物產(chǎn)生絕望的不動狀態(tài)過程中的一系列參數(shù),動物的表現(xiàn)出的這種典型的“不動狀態(tài)”,反映了一種被稱之為“行為絕望狀態(tài)”,這種行為絕望模型類似,而且對絕大多數(shù)抗抑郁藥物敏感,而且其藥效與臨床藥效顯著相關(guān),所以被廣泛用于抗抑郁藥物的初選。
二、實驗方法及注意事項
正確的懸尾實驗該怎么做?搜索一下網(wǎng)頁,看到實驗者更關(guān)注一些細節(jié)問題,如:怎么懸掛?用什么懸掛?空間多少合適?距離底面多少?小鼠攀爬尾巴怎么解決等問題!如何避免老鼠疼痛引起不適?我們今天在這里討論一下!供大家參考:
TST 懸尾實驗不建議用較重的大鼠,因為大鼠只能通過它們的尾巴來支持它們的體重,這對大鼠來說是痛苦的。同樣的道理,應(yīng)該注意避免使用異常重的小鼠(例如用于模擬肥胖的小鼠),在這種情況下,實驗者應(yīng)該尋找替代性的測試,例如強迫游泳實驗。
動物從居住環(huán)境帶入實驗環(huán)境應(yīng)適應(yīng)一段時間,通常至少一個小時。
實驗環(huán)境應(yīng)保持安靜,突然大的噪音會使小鼠驚慌失措。
使用軟件分析時,選擇z佳對比度的背景:白鼠使用黑色背景,黑鼠使用白色背景;也可選擇使用由上海欣軟信息科技有限公司生產(chǎn)的帶背光板的專業(yè)懸尾實驗設(shè)備;對老鼠的顏色沒有要求,更可拍攝出高質(zhì)量,高對比度的實驗錄像。
每只小鼠的實驗空間多大?參考空間在 55 高*15 寬*11.5 cm 左右,多通量實驗時,為防止動物彼此觀察或互相影響,中間用隔板隔開;動物懸掛在隔間中間,寬度和深度足夠大,不能與墻壁接觸。
懸掛后動物鼻尖與設(shè)備地板之前的距離多少?參考距離在 20~25 cm 左右。
底部建議放置一個可拆卸的拖盤,收集糞便或尿液。
懸掛用的膠帶應(yīng)牢固地粘貼在小鼠尾部和懸掛桿上,并且足夠堅固以承受正在測試的小鼠的重量。但是,膠帶不應(yīng)該過于粘滯,因為在實驗結(jié)束會從尾部移除。膠帶尺寸應(yīng)統(tǒng)一,長度 17 厘米,從一端 2 厘米做標(biāo)記。這個 2 厘米的部分用于將膠帶連接到尾部,而剩余的 15 厘米用于懸掛小鼠;膠帶應(yīng)貼在尾部的尾端,尾部留 2-3 毫米的距離。
尾巴攀爬阻止器,小鼠在實驗過程,會出現(xiàn)追求和攀爬它們自己的尾巴的現(xiàn)象,這是個普遍的問題。解決方法很簡單,而且非常有效:將一段塑料管切成 4 cm 長中空圓柱體(內(nèi)徑 1.3 cm 左右,1.5 g)放置在小鼠尾巴周圍就能防止這種尾巴爬行行為。注意的是,在沒有使用阻止器之前,已經(jīng)成功爬上尾巴的小鼠知道逃生是可能的。因此應(yīng)將這類小鼠排除。
分析時僅有前肢但沒有后肢介入的小動作可判斷為不動;因慣性產(chǎn)生的擺動可判斷為不動;
上海欣軟信息科技有限公司推出的Super系列行為學(xué) Tail Suspension 分析軟件(SuperTst懸尾軟件)可識別動物的多體位輪廓特征,準(zhǔn)確區(qū)分并識別出活動和不動行為。
實驗結(jié)束后(通常是 6 分鐘),將動物放回鼠籠,應(yīng)輕輕將膠帶從尾巴上拉下來,不要從尾巴上撕扯膠帶,避免給動物帶來痛苦;
清潔用品,每次實驗完成,收集糞便和尿液,*擦拭懸掛盒。
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