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Morris水迷宮( Morris water maze，MWM) 是用 于研究嚙齒類動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶的經(jīng)典行為學(xué)實(shí)驗(yàn)方 法。在用于學(xué)習(xí)記憶機(jī)制、藥物對學(xué)習(xí)記憶的改善、評價(jià)疾病模型等研究時(shí)，實(shí)驗(yàn)學(xué)者多采用測試期的逃避潛伏期平均數(shù)差別是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義來評價(jià)模型是否成功或藥物是否起到作用，而缺乏實(shí)驗(yàn)過程中小鼠學(xué)習(xí)規(guī)律的系統(tǒng)性研究與評價(jià)。且不同實(shí)驗(yàn)室對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物每天訓(xùn)練次數(shù)及總訓(xùn)練時(shí)程各不同一，使得在進(jìn)行各實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)結(jié)果對比和評價(jià)時(shí)，會(huì)影響各實(shí)驗(yàn)結(jié)果間的比較和實(shí)驗(yàn)參考價(jià)值，使實(shí)驗(yàn)質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)效率降低。基于目 前水迷宮實(shí)驗(yàn)存在的問題，本實(shí)驗(yàn)采用文獻(xiàn)報(bào)道較多的每天訓(xùn)練2次、3次兩種不同的訓(xùn)練方式，考 察不同訓(xùn)練方式對小鼠學(xué)習(xí)記憶成績的影響，分析實(shí)驗(yàn)過程中小鼠學(xué)習(xí)成績變化規(guī)律，并得出不同訓(xùn)練方式下小鼠的最佳訓(xùn)練時(shí)程。

01
實(shí)驗(yàn)設(shè)備

XR-XM101型 Morris水迷宮視頻跟蹤分析系統(tǒng)，上海欣軟信息科技有限公司。包括 XR-XM101型Morris水迷宮和VisuTrack動(dòng)物行為分析軟件：水迷宮圓形水池(D=120cm，h=30cm) ；平臺(tái)(D= 9cm，h=15cm) 。

Tip：Morris水迷宮測試是需要使用的染料可以是黑色/白色的食用色素，也可以是二氧化鈦，不建議使用墨水或者牛奶，牛奶成本高且容易變質(zhì)發(fā)臭，墨水本身有氣味，容易應(yīng)激。

02
經(jīng)典實(shí)驗(yàn)方法

• 適應(yīng)性訓(xùn)練

正式實(shí)驗(yàn)前一天，不放置平臺(tái)，讓小鼠自由游 泳120s。訓(xùn)練完畢后立即取出小鼠并擦干以避免應(yīng)激反應(yīng)。

• 定位航行實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)前，將不同標(biāo)記物分別貼在4個(gè)象限。平臺(tái)在水面以下1cm 處，水溫控制在( 20.0±2) ℃，并 用二氧化鈦將水染成乳白色。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠在除目標(biāo)象限(平臺(tái)所在象限) 之外的三個(gè)象限隨機(jī)面對池壁放入水中，當(dāng)小鼠找到平臺(tái)后，記錄潛伏期，并 在平臺(tái)上停留30s; 如果小鼠在120s內(nèi)未找到平臺(tái)，潛伏期記為120s，并引導(dǎo)小鼠在平臺(tái)上停留30s，讓其根據(jù)四個(gè)象限的參照物進(jìn)行空間學(xué)習(xí)記憶。每次訓(xùn)練完成后將小鼠立即取出并擦干以避免應(yīng)激反應(yīng)。記錄小鼠的游泳速度，逃避潛伏期、外環(huán)滯留時(shí)間百分比，目標(biāo)象限滯留時(shí)間百分比等指標(biāo)。

2次/d 組于每天10 點(diǎn)、14點(diǎn)對實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行 定位航行實(shí)驗(yàn);3次/d 組于每天8點(diǎn)、12點(diǎn)、16點(diǎn)對實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行定位航行實(shí)驗(yàn)。

03
實(shí)驗(yàn)結(jié)果

• 游泳速度變化

組內(nèi)游泳速度比較：同一訓(xùn)練次數(shù)下，2 次/d 組和3 次/d 組不同 批次小鼠間的游泳速度比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異( P＞ 0．05) ，如圖見。

兩組游泳速度比較：由于每組不同批次小鼠之間的游泳速度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，因此將每組的三批實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分別合并為大數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。同一訓(xùn)練次數(shù)下，2 次/d、3 次/d 組小鼠游泳速度比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異( P＞0.05) 。說明兩組小鼠的體力沒有差別，并且隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加小鼠的游泳速度也無明顯的變化，如圖。

• 外環(huán)滯留時(shí)間百分比比較

組內(nèi)外環(huán)滯留時(shí)間百分比比較：同一訓(xùn)練次數(shù)下，2 次/d 組和 3 次/d 組不同批次小鼠間的外環(huán)滯留時(shí)間百分比比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異( P＞0.05) ，如圖。

兩組外環(huán)滯留時(shí)間百分比比較：由于兩組不同批次小鼠間的外環(huán)滯留時(shí)間百分比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，因此分別將每組的三批實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)合并成大數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。同一訓(xùn)練次數(shù)下，2次/d、3次/d 組小鼠的外環(huán)滯留時(shí)間百分比比 較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異( P＞0.05) 。與自身第1次外環(huán)滯留時(shí)間百分比相比，2次/d 組和 3次/d 組小鼠 分別在第 3 次和第4次開始出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異( P＜ 0.05) ，并分別從第3次和第4次開始趨于穩(wěn)定，如圖。

04
記錄要點(diǎn)

在MWM實(shí)驗(yàn)中，小鼠可通過一定時(shí)程的多次 訓(xùn)練而獲得對空間的認(rèn)知。但目前訓(xùn)練方式、總訓(xùn)練時(shí)程對訓(xùn)練有無影響以及選取哪種訓(xùn)練方式缺乏相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)有每天訓(xùn)練1次、5天共5次，每天訓(xùn)練2次、4天共8次，每天訓(xùn)練3次、5天共15次，每天訓(xùn)練4次、4 天共16次，每天8次、2 天共 16次等，其中應(yīng)用較多的是每天訓(xùn)練2次或3次、總訓(xùn)練次數(shù)15次。因此本文選擇每天訓(xùn)練2、3次、總訓(xùn)練次數(shù)15次進(jìn)行定位航行實(shí)驗(yàn)，以游泳速度判斷 各組及各批次小鼠學(xué)習(xí)成績的差異非體力及速度 差異所致; 以逃避潛伏期并輔以外環(huán)滯留時(shí)間百分比及目標(biāo)象限滯留時(shí)間百分比進(jìn)行學(xué)習(xí)成績判定。 結(jié)果顯示連續(xù)15次訓(xùn)練完成后，同一訓(xùn)練次數(shù)下， 2 次/d 組和 3次/d 組小鼠相比各指標(biāo)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異; 每組不同批次小鼠間各指標(biāo)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。說明兩種訓(xùn)練方式小鼠學(xué)習(xí)成績沒有明顯差別，且本實(shí)驗(yàn)選擇的兩種訓(xùn)練方式具有良好的重現(xiàn)性，因此建議根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體情況選擇每天訓(xùn)練 2次或3次均可。